مالیکولي بيولوژيکي څېړنې ميتود او د هغوی د استعمال

مالیکولي بيولوژيکي څېړنې ميتود په عصري طب، عدلي طب د علم، او بیولوژي يو مهم رول ولوبوي. په د DNA او RNA د مطالعې پرمختګونه مننه، هغه شخص کولای شي د اورګانيزم د جینونو ولټوي د معلومولو لپاره د عمده عوامل استازي، چې د اسيدونه، او داسی نور یو مخلوط مطلوبه نوکليک اسيد پیژني

مالیکولي-بيولوژيکي ميتودونو. دا څه دي؟

Back کې د پوهانو د 70-80s وه د لومړي ځل لپاره لوستلی شو د بشر د جینونو. دغه پيښه چې د ارثي انجينري او مالیکولي بیولوژي په پرمختګ پراخولو ژمنه ورکړه. د د DNA او RNA مال مطالعه په دې معنا چې دا اوس ممکنه ده چې د ناروغۍ د تشخیص، د مطالعې جین په موخه د دغو نوکليک اسيد وکاروي.

د DNA او RNA د تیاري

مالیکولي بيولوژيکي تشخیصیه ميتودونو اکثره دې: اړتیا مادي پیل نوکليک اسيد. د دغو موادو څخه د ژوندیو موجوداتو د حجراتو د ټاکلو څو لاری شته دی. هر ګټي او نيمګړتياوي لري، او دا بايد په خالص ډول نوکليک اسيد یوازې یو میتود ټاکلو کله پام کې ونیول شي.

له خوا Marmur د DNA 1. د تیاري د. دغه ميتود د الکولو موادو د مخلوط په درملنه کې جوړ، precipitates پایله سوچه (DNA). د دې میتود حالتونه د ده د زنګ موادو، phenol او chloroform د استعمال.

د DNA په داومداره 2. ګوښه. اصلي ماده ده چې دلته کارول - ده guanidine thiocyanate (GuSCN). دا د ښکارته وده deoxyribonucleic اسيد پر تخصص substrates، چې دا کیدای شي وروسته له خوا د یوې ځانګړې ډال وسيله راټولې کړې. خو GuSCN - د TCP یو inhibitor، او په DNA کی حتی د چې يوه کوچنۍ برخه ورسره امانت کولای شي د polymerase کړۍ غبرګون، کله چې د نوکليک اسيد کار چې مهمه ده د کورس د نفوذ ولري.

3. د شبهو چارشنبه. د میتود څخه د پخوانيو هغو په چې د مالیکولونو په خپله دي dehoksiribonukleinovoy اسيد او شبهو څخه امانت نه توپير لري. د دې، د ایون exchangers وکاروي. د تاوان دا دی چې د ټولو موادو نه شي کولای د حل.

4. د ټوليزو چاڼ. دا ميتود په قضیو کې کارول کله چې تاسو ته اړتيا نه لری چې د DNA په ماليکول کي د جوړښت، او د ضرورت ځينې شمېرې تر لاسه کړو په اړه کره معلومات نه لري. دليل يې دا دی چې د نوکليک اسيد جوړښت شي وبخښی، په ځانګړې توګه alkalies د سمبالولو پر مهال ويجاړ.

د څيړنې ميتود طبقه بندي

د څيړنې ټول مالیکولي-بيولوژيکي ميتودونو په درې سترو ډلو ویشل شوي دي:

1. Amplification (انزایمونو ماتو د کارولو). په دې کې د PCR - polymerase کړۍ غبرګون، چې د تشخيص میتودونه ډیر مهم رول لوبوي.

2. Neamplifikatsionnye. د میتودونو دا ډله په مستقیمه توګه سره د نوکليک اسيد مخلوط د کار تړاو لري. مثالونه دي 3 ژانر blots، په رښتينۍ توګه دوه رګه، او داسې نور

3. د ميتودونو په اساس د څېړنو داسې ماليکيول دی، چې د یو ځانګړي یا DNA او یا د RNA د څېړنو ټینګ څخه سیګنال د اعلانولو. بیلګه - رګه سيستم Hybride او نيولو سیستم حل (HC2).

انزايمونو چې کولای شو چي بيولوژيکي څېړنې ميتود وکارول شي

زياتره مالیکولي تشخیصیه تخنيکونه شامل د انزایمونو د پراخې ساحې د استعمال. په لاندې ډول دي زیاتره کارول:

1. د محدوديت انزايم - "پرې" د DNA ته د اړتيا وړ برخو ماليکيول.

2. د DNA polymerase - يادېږي یوه دوه بندېدو-deoxyribonucleic اسيد ماليکيول.

3. سرچپه transcriptase (transcriptase وګرځوي) - کارول یو RNA کېنډۍ څخه د DNA جوړولای.

4. د DNA ligase - لپاره د نیوکلیوتایدونو تر منځ phosphodiester بانډونو د جوړېدو په غاړه لري.

5. exonuclease - څخه د deoxyribonucleic اسيد ماليکيول پای برخي نیوکلیوتایدونو لرې.

PCR - د (DNA) amplification اساسي میتود

Polymerase کړۍ غبرګون (PCR) په پراخه عصري مالیکولي بیولوژي په کارول. دا طريقه، چې د يو واحد د DNA ماليکول کولای شي د کاپی (amplifying ماليکيول) Great شمیر تر لاسه شي.

د PCR اصلي دندې:

- د ناروغیو د تشخیص؛

- جنينو DNA د برخو، جین.

د DNA لومړنۍ ماليکيول، یو thermostable د DNA polymerase (د تاق او يا د PFU)، deoxyribonucleotide phosphates (د نايتروجن اډو سرچينې)، primers (2 primer 1 د DNA ماليکول) پخپله ډال سيستم، چې کیدای شي ترسره کړي: د یوه polymerase کړۍ غبرګون ترسره لاندې عناصرو ته اړتيا لري ټول غبرګونونه.

Denaturation، primer annealing او اوږدیدلو: PCR د درې ګامونه شامل دي.

1. Denaturation. د 94-95 سانتي ګيراد درجې proshodit يو د حرارت د DNA د دواړو تر منځ د ځنځیر هایدروجن بانډونو مات کړي، او په پايله کې موږ دوه واحد د بندېدو-مالیکولونو تر لاسه.

2. annealed primers. د 50-60 درجو د تودوخې تودوخه کې په د بشپړتیا لپاره د ډول له مخې د واحد د بندېدو-نوکليک اسيد د مالیکول پای پسي primers واقع دی.

3. د اوږدیدلو. د 72 درجو د تودوخې ده دننه لور دوه چنده deoxyribonucleic اسيد مالیکولونو د بندېدو.

د DNA د تسلسل

مالیکولي بيولوژيکي څېړنې ميتود تل د deoxyribonucleic اسيد يو داسې ماليکيول د نیوکلیوتایدونو په ترتیب پوهې ته اړتيا لري. د معلومولو جنيټيک کوډ له تسلسل. د راتلونکي مالیکولي تشخيصولو به د علم د انسان د تسلسل د هوډ ترلاسه شي.

د تسلسل لاندې ډولونو د:

• د تسلسل د Maxam-Gilbert له خوا؛
• سنګر تسلسل؛
• pyrosequencing؛
• nanoporovoe تسلسل.